產(chǎn)品名稱：創(chuàng)傷弧菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for vibrio vulnificus

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡介：本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于創(chuàng)傷弧菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。

檢測原理：利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進行鏈置換擴增反應，實現(xiàn)在恒溫條件下（60-65℃）進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。

產(chǎn)品特點：
      1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內(nèi)完成；
      2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性；
      3. 靈敏度高：最-低檢驗限達到18 CFU/Test；
      4. 判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

創(chuàng)傷弧菌核酸快速檢測試劑盒產(chǎn)品組分：

儲存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲存，有效期為12個月。

適用儀器：
      1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
      2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

樣品富集：
      1. 樣品前處理：參照《SN_T_2754_13-2011_出口食品中致病菌環(huán)介導恒溫擴增(LAMP)檢測方法_第12部分：創(chuàng)傷弧菌》或各實驗室自行建立或參考的前處理方法。
      2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
      3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，存放時間不應該超過24 h；利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。

恒溫熒光法核酸快速檢測試劑盒操作流程

創(chuàng)傷弧菌核酸快速檢測試劑盒使用指南：

1，樣品前處理

   A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
         a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清，50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次，6000 r/min離心5 min，完-全去除上清；
         b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
         c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

   B. 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。

2，陰、陽性對照和干粉試劑復溶

   A. 陰、陽性對照復溶：首-次使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
   B. 干粉試劑復溶：取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照），每管加入20 μL復溶液，完-全溶解后待用。

3，擴增反應
   A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到63℃待用；
   B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
   C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子；
   D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中，恒溫63℃反應50 min。

4，結(jié)果判讀：反應結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

恒溫熒光法核酸快速檢測試劑盒靈敏度對比

創(chuàng)傷弧菌核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法)用于創(chuàng)傷弧菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。

創(chuàng)傷弧菌核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法)用于創(chuàng)傷弧菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。